Dung dịch Ammonium Chloride được khuyến nghị dùng để ly giải tế bào hồng cầu (RBCs) trong các chế phẩm của máu ngoại vi người, chuột, lá lách hoặc tế bào tủy xương. Ammonium Chloride được sử dụng như dung dịch đệm, tối ưu hóa để ly giải hồng cầu một cách nhẹ nhàng trong khi tác dụng tối thiểu lên bạch cầu. Nó không chứa tác nhân cố định, do đó bạch cầu có thể tồn tại sau quá trình ly giải hồng cầu.

Thành phần:

• 0,8% NH4Cl

• 0,1 mM EDTA pha trong nước, được đệm bằng KHCO3 để đạt được độ pH cuối cùng là 7,2-7,6

Hướng dẫn sử dung:

Chuẩn bị phần tế bào đa nhân trung tính (Polymorphonuclear Cell) từ máu toàn phần bằng cách ly giải hồng cầu sử dụng Ammonium Chloride

1. Thu thập máu toàn phần vào ống lấy máu có chứa heparin hoặc một chất chống đông máu khác.
2. Thêm Lymphoprep™ vào ống. Để biết khối lượng phù hợp, vui lòng xem bảng thông tin sản phẩm.
3. Pha loãng máu toàn phần tỉ lệ 1:1 Dulbecco's Phosphate Buffered Saline với 2% Fetal Bovine Serum (PBS + 2% FBS; Catalog #07905), hoặc môi trường nuôi cấy thích hợp khác.
4. Cẩn thận cho lớp máu lên trên Lymphoprep™, để giảm thiểu sự trộn lẫn máu với Lymphoprep ™.
5. Ly tâm trong 20 phút ở 800 x g ở nhiệt độ phòng (15-25oC), ngắt phanh.
6. Tái huyền phù các tế bào hồng cầu trong Dung dịch Amoni Clorua (#07800/07850) để ly giải hồng cầu. Đổ đầy hoàn toàn vào ống bằng dung dịch ly giải RBC và ủ trên đá trong 10 phút.Loại bỏ lớp huyết tương, dải tế bào đơn nhân và Lymphoprep ™, để lại lớp “pellet’ hồng cầu (RBC)/bạch cầu hạt. Tùy chọn: Tại thời điểm này, lớp “pellet” có thể được chuyển sang một ống mới để tránh bị nhiễm bởi các tế bào đơn nhân còn sót lại trong ống.
7. Tái huyền phù các tế bào hồng cầu trong Dung dịch Amoni Clorua (#07800/07850) để ly giải hồng cầu. Đổ đầy hoàn toàn vào ống bằng dung dịch ly giải RBC và ủ trên đá trong 10 phút.
8. Ly tâm trong 10 phút ở 500 x g ở nhiệt độ phòng, với phanh đặt ở mức thấp.
9. Loại bỏ phần dung dịch nổi phía trên (Supernatant) và rửa phần “pellet” trong PBS + 2% FBS để loại bỏ tiểu cầu, ly tâm trong 10 phút ở 120 x g ở nhiệt độ phòng, tắt phanh.
10. Tái huyền phù các tế bào đa nhân trung tính (PMNCs) vừa thu được trong môi trường thích hợp (ví dụ: PBS + 2% FBS).

Thông tin đặt hàng