Đang cập nhật
Tổng quan về Bộ kit HepatiCult™ Organoid Kit (Human)
Bộ kit HepatiCult™ Organoid Kit (Human) tạo ra, mở rộng và biệt hóa các cơ quan gan người có liên quan đến sinh lý một cách đáng tin cậy. So với các hệ thống mô hình được sử dụng theo truyền thống như dòng tế bào và mô hình động vật, các cơ quan gan người cung cấp một hệ thống mô hình có liên quan hơn để nghiên cứu sự phát triển, tái tạo, chuyển hóa và bệnh tật của gan.
Bộ kit chứa tất cả các thành phần cần thiết để nuôi cấy organoid gan người từ mô gan người tươi hoặc đông lạnh.
Tính năng nổi bật:
- Cung cấp một hệ thống nuôi cấy hoàn chỉnh để thiết lập, duy trì và biệt hóa các organoid gan người
Cho phép khởi đầu organoid hiệu quả trên các mô gan của người hiến tặng khác nhau
Tạo ra các organoid gan trưởng thành thể hiện hoạt động của CYP3A4
Cho phép linh hoạt thử nghiệm với các định dạng nuôi cấy khác nhau
Ứng dụng: nuôi cấy organoid
Thành phần bộ kit:
HepatiCult™ Organoid Kit (Human) (Catalog #100-0386) bao gồm:
- HepatiCult™ Organoid Basal Medium (Human) (Catalog #100-0387), 3 chai x 95 mL/chai: Tạo ra organoid gan một cách hiệu quả trên nhiều dòng hiến tặng khác nhau.
- Organoid Supplement (Catalog #100-0191), chai 50 mL: Bổ trợ cho quá trình tạo ra organoid gan một cách hiệu quả
- HepatiCult™ Organoid Growth Supplement (Human) (catalog #100-0389), 2 lọ x 5 mL/lọ: Mở rộng và duy trì organoid gan cho mục đích thử nghiệm hoặc lưu trữ sinh học trong tương lai.
- HepatiCult™ Organoid Differentiation Supplement (Human) (catalog #100-0388), 5 mL/lọ: Tạo ra organoid trưởng thành thể hiện chức năng gan, bao gồm hoạt động của CYP3A4. Các organoid này có thể được điều chỉnh cho phù hợp với nhiều quy trình nuôi cấy, bao gồm nuôi cấy lớp đơn 2D, nuôi cấy huyền phù và xét nghiệm thông lượng cao
Kết quả dự kiến:
Hình 1. Bộ kit HepatiCult™ Organoid (Người) cho phép khởi đầu, mở rộng và biệt hóa organoid gan
Các organoid gan của người có thể được nuôi cấy từ các ống gan có nguồn gốc từ mô gan người bình thường bằng cách sử dụng Bộ kit HepatiCult™ Organoid (Người). (A) Nuôi cấy trong Môi trường HepatiCult™ Organoid Initiation Medium (OIM; Người) hoặc Môi trường HepatiCult™ Organoid Growth (OGM; Người) (xem Bảng 1 bên dưới) và sau đó chuyển qua HepatiCult™ OGM để mở rộng. (B) Sau khi chuyển qua HepatiCult™ OGM 2-3 lần, mẫu cấy có thể được chuyển sang Môi trường biệt hóa HepatiCult™ Organoid (ODM; Người) để biệt hóa các organoid gan thành các loại tế bào gan trưởng thành. Tham khảo Hướng dẫn sản phẩm (Tài liệu #10000008301) để biết quy trình nuôi cấy đầy đủ.
Bảng 1. Khuyến nghị về sản phẩm để khởi đầu, mở rộng và biệt hóa organoid gan
Cấu hình được đề xuất của Bộ kit HepatiCult™ Organoid (Người) có thể khác nhau dựa vào nguyên liệu ban đầu và mục tiêu thử nghiệm. Khi thiết lập mẫu nuôi cấy organoid gan từ mô gan người, nên sử dụng HepatiCult™ Organoid Initiation Medium (OIM; Người) để khởi đầu nuôi cấy organoid hiệu quả (xem Hình 2 bên dưới). Môi trường HepatiCult™ Organoid Growth Medium (OGM; Người) hỗ trợ việc mở rộng các organoid đã thiết lập (tươi trong nuôi cấy hoặc bảo quản đông lạnh). Các organoid này nên được duy trì trong 2-3 lần cấy trước khi biệt hóa thêm bằng Môi trường biệt hóa HepatiCult™ Organoid Differentiation Medium (ODM). Tham khảo Hướng dẫn sản phẩm (Tài liệu #10000008301) để biết đầy đủ các quy trình nuôi cấy.
Hình 2. Bộ dụng cụ HepatiCult™ Organoid (Người) cung cấp khởi đầu Organoid hiệu quả từ mô gan người
(A) Nuôi cấy organoid được khởi đầu trong HepatiCult™ OIM, sau đó (B) chuyển vào HepatiCult™ OGM. Đối với điều kiện nuôi cấy không có huyết thanh, nuôi cấy organoid được (C) khởi đầu và (D) chuyển vào HepatiCult™ OGM. Hình ảnh nuôi cấy được hiển thị từ (A, C) ngày 15 sau khi khởi đầu và (B, D) vào ngày 8 của lần cấy chuyền đầu tiên. (E) Định lượng hiệu quả khởi đầu organoid cho thấy sản lượng organoid cao hơn đáng kể trong HepatiCult™ OIM trên mỗi gam mô gan người (mean ± SD; n = 14).
Hình 3: Môi trường HepatiCult™ Organoid Initiation (Người) hỗ trợ việc thiết lập organoid mạnh mẽ trên nhiều mẫu mô gan hiến tặng
Organoid khởi đầu từ 4 mẫu mô hiến tặng (A-D) biểu hiện tính không đồng nhất về mặt hình thái sau 15 ngày khởi đầu. Tất cả các mẫu nuôi cấy khởi đầu sau đó được mở rộng trong HepatiCult™ OGM bằng cách sử dụng tỷ lệ truyền 1:1 (E-H), tạo ra các organoid khỏe mạnh vào cuối giai đoạn đầu tiên.
Hình 4. Sự mở rộng của các mẫu nuôi cấy organoid trong HepatiCult™ Organoid Growth Medium
Các organoid gan cho thấy sự phát triển hiệu quả trong HepatiCult™ OGM trên nhiều người hiến tặng và các lần chuyền với tiềm năng nuôi cấy vô thời hạn. Các organoid được khởi đầu bằng quy trình không có huyết thanh cho thấy tốc độ tăng trưởng tương đương khi được mở rộng trong HepatiCult™ OGM (các dấu hiệu (marker) mở).
Hình 5. Các cơ quan gan tăng sinh thể hiện các đặc điểm của tiền thân gan
Các cơ quan gan người được nuôi cấy trong HepatiCult™ OGM thể hiện các đặc điểm của tiền thân gan tăng sinh được quan sát thấy thông qua nhuộm hóa mô miễn dịch tế bào của (A) KI67, (B) HNF4A và (C) SOX9. Các cơ quan gan tăng sinh cũng thể hiện các đặc điểm của biểu mô gan bao gồm biểu hiện của (A) EPCAM. (B, C) Nhân được nhuộm tương phản với DAPI.
