Mục lục
Công nghệ không nhuộm (Stain-free©) cung cấp một sự thay thế thú vị cho các thuốc nhuộm proteins tiêu chuẩn như Coomassie© Blue thường được sử dụng để quan sát quá trình phân tách, xác định độ tinh sạch và tải các mẫu protein lên gel PAGE (polyacrylamide gel) như một phần của kỹ thuật western blotting. Gel Stain-free© không yêu cầu sử dụng thuốc nhuộm nào và tương thích với các dung dịch đệm tiêu chuẩn dùng trong điện di SDS-PAGE.
Nguyên lý của công nghệ không nhuộm (stain-free©) để phát hiện protein tổng số là sử dụng hợp chất trihalo được đưa sẵn vào gel stain-free© tạo sẳn (như Criterion©, Mini Protean©), cộng với việc quang hóa protein trong thời gian ngắn, giúp nhìn thấy protein trong quá trình điện di. Hợp chất trihalo sẽ liên kết cộng hóa trị với những phân tử amino acid Tryptophan trong cấu trúc Protein và phát huỳnh quang dưới tác động kích thích của tia UV. Tín hiệu hùynh quang sau đó sẽ được ghi nhận hay được đọc bằng các máy đọc gel Uvitec.
Những hình ảnh Criterion© TGX Stain-free© gel được chụp với hệ thống Alliance™ Q9 Advanced sau 2 phút hoạt hóa tryptophan với hộp đèn Uvipure™ 312nm transilluminator.
Với gel không nhuộm (Stain-free©), việc phát hiện protein được thực hiện nhờ vào sự hoạt hóa tryptophan thông qua tiếp xúc tia cực tím xuyên qua liên tục cho đến khi các băng protein được thấy và hình ảnh được chụp.
Do đó, hộp đèn UV Box hoặc hộp đèn Uvipure™ có bước sóng 312nm được đề nghị sử dụng để hoạt hóa tryptophan, nhưng bất kỳ nguồn sáng có bước sóng từ 250 đến 320nm tiêu chuẩn nào cũng có khả năng chụp ảnh gel Stain-free©.
Vận hành, kích hoạt và chụp ảnh gel Stain-free© với các dòng máy chụp ảnh gel quang hóa Alliance™ Q9 hoặc một trong các máy chụp ảnh Uvitec Geldoc được thực hiện nhanh chóng, đơn giản nhờ vào phần mềm tích hợp chế độ thu nhận hình ảnh trực tiếp. Chế độ thu nhận hình ảnh trực tiếp cho phép quan sát khi gel không nhuộm tiếp xúc với tia cực tím liên tục và tryptophan được hoạt hóa ở trạng thái lý tưởng. Hình ảnh hiển thị trên màn hình là trực tiếp và cho thấy các băng protein xuất hiện khi gel được chiếu xạ tia cực tím.
Hình ảnh sau đó có thể được phân tích ngay lập tức. Sau quá trình chuyển màng lai, một hình ảnh khác của gel Stain-free© có thể được chụp cho phép xác nhận hệ số chuyển màng.
Kỹ thuật thực hiện western blotting truyền thống thường được sử dụng. Nhưng kỹ thuật western blot quang hóa (chemiluminescent ECL westerns) sẽ giúp tối ưu hóa hình ảnh được chụp bằng máy chụp ảnh gel Alliance™ Q9, với độ nhạy cực tốt (ống kính f/0.80, camera lạnh -60°C camera, dãy động học 4,8 OD) và độ phân giải vượt trội (độ phân giải máy ảnh 9,2 megapixels) và phần mềm bản quyền hoàn toàn miễn phí cho người dùng không giới hạn. Một nền tảng chụp ảnh giống nhau cho tất cả các ứng dụng.
