Mục lục
Tế bào CD34 trong mẫu được đếm dựa vào thuốc nhuộm huỳnh quang. Đầu tiên, mẫu tế bào được nhuộm với hỗn hợp thuốc nhuộm pha sẵn, các kháng thể được đánh dấu huỳnh quang sẽ gắn đặc hiệu lên kháng nguyên CD34+ và CD45+ trên bề mặt tế bào, các tế bào chết được nhuộm bằng thuốc nhuộm Sytox Blue (Hình 1).
Hình 1. Tế bào CD34 được nhuộm với thuốc nhuộm huỳnh quang.
Sau khi nhuộm xong, dung dịch đệm ly giải hồng cầu được thêm vào để ly giải hồng cầu. Mẫu sau khi ly giải được nạp vào buồng đếm nhựa dùng một lần, sau đó buồng đếm được đặt trên vị trí đếm của thiết bị ADAMII. Quy trình thực hiện được mô tả như hình 2.
Hình 2. Quy trình thực hiện đếm tế bào bằng thiết bị ADAM II - CD34
Từ đó, thiết bị có thể phân tích tự động và cho ra 07 kết quả:
ADAM II - CD34 là máy đếm tế bào huỳnh quang dựa vào hình ảnh, có khả năng chụp và phân tích nhiều hình ảnh. Máy được trang bị nguồn sáng 4 kênh, bao gồm: trường sáng, Vàng (PE), Đỏ (PerCP) và Xanh lục (FITC).
Máy có thể dùng cho các mẫu: máu ngoại vi bình thường và huy động (PB/MPB), mẫu tách tế bào tiền thân tạo máu tươi (HPC-A), máu cuống rốn tươi và đông lạnh, tủy xương.
Cung cấp kết quả chính xác và tin cậy với tốc độ nhanh, giảm thiểu thời gian thực hiện của kỹ thuật viên.
Độ chính xác của kết quả được nâng cao do đơn giản hóa bước chuẩn bị mẫu, loại bỏ các bước rửa và hoàn nguyên có thể gây mất tế bào do lỗi kỹ thuật của con người.
Kết quả báo cáo rõ ràng trên phần mềm, hạn chế các bước giải thích của người dùng.
ADAM II - CD34 cho thấy mối tương quan cao với phương pháp tế bào học dòng chảy.
Tổng 36 mẫu đã được dùng để so sánh máy ADAM II – CD34 (NanoEntek, Hàn Quốc) và hệ thống phân tích tế bào dòng chảy, với 2 dòng máy FACS CaliburTM (BD Bioscience) và FACS CantoIITM (BD Bioscience), với bộ hóa chất Stem Cell Enumeration kitTM (BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ). Phân tích hồi quy tuyến tính cho thấy mối tương quan giữa kết quả đếm tế bào CD34 của ADAMII và FACSCaliburTM với hệ số R2 của số lượng CD34 tuyệt đối và tỉ lệ tế bào lần lượt là 0.99 và 0.98 (Hình 3A). Tương tự, hệ số tương quan cao cũng được ghi nhận khi so sánh ADAMII-CD34 với FACS CantoIITM với R2 lần lượt là 0.98 và 0.98 (Hình 3B).
Hình 3A. Mối tương quan giữa kết quả đếm CD34 bằng ADAMIITM và FACS CaliburTM
Hình 3B. Mối tương quan giữa kết quả đếm CD34 bằng ADAMIITM và FACS CantoIITM
Thiết bị ADAMII-CD34 cho kết quả chính xác với độ nhất quán cao khi so sánh cùng dòng máy ở các đơn vị khác nhau với các nồng độ tế bào thấp, vừa, cao (Hình 4).
Ba lần lặp lại của hai lần chạy mẫu riêng biệt, liên tục trong 5 ngày được đánh giá độ tái lập giữa các ngày, lần chạy, địa điểm (Hình 5). Kết quả cho thấy độ tái lập (reproducibility) cao.
Hình 4. Kết quả nhất quán giữa các đơn vị đo trên cùng dòng máy ADAMII-CD34
Hình 5. Kết quả so sánh độ tái lập giữa 3 đơn vị, trong 5 ngày liên tiếp với 2 lần chạy và 3 lần lặp lại.
Link: https://synapse.koreamed.org/DOIx.php?id=10.3343/alm.2019.39.4.388
Link: http://www.cpho.or.kr/journal/view.html?vol=23&num=2&page=125&year=2016
[1] Tài liệu hướng dẫn sử dụng máy
[2] New microscopic cell counter using autofocusing system does not require CD45 staining to enumerate CD34+ stem cells: comparison with flow cytometric analysis. In 42nd Annual meeting of the European society for blood and marrow transplantation. European society for blood and marrow transplantation.
