Phân Lập Và Tinh Sạch EV Với Bộ Dụng Cụ Chọn Lọc Dương Tính Túi Ngoại Bào Easysep™ Của Người

Các túi ngoại bào (EV), bao gồm exosome và microvesicles, là được bao quanh bởi màng kép lipid có cấu trúc tự nhiên, được giải phóng từ tế bào. EV tham gia vào chức năng giao tiếp giữa các tế bào trong điều kiện cân bằng nội môi và bệnh lý, thường được đặc trưng bởi sự biểu hiện của protein tetraspanin CD9, CD63 và CD81. Lumen của EV chứa protein, RNA/DNA, cytokine hoặc lipid phản ánh trạng thái của tế bào gốc. Từ các nghiên cứu cơ bản về EV, hiện nay mối quan tâm ngày càng tăng trong việc nghiên cứu thành phần của EV để xác định các dấu ấn sinh học chẩn đoán hoặc tiên lượng bệnh cũng như đánh giá tiềm năng điều trị của EV.

Tại sao nên sử dụng Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ ở người?

• Phân lập EV của người trong ít nhất 30 phút mà không cần sử dụng cột
• Tránh nhu cầu siêu ly tâm và các phương pháp phân lập EV tốn thời gian khác.
• Hiệu quả cao hơn so với các phương pháp phân lập EV dựa trên siêu ly tâm

Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ ở người

Các phương pháp phân lập EV truyền thống dựa trên gradient tỉ trọng yêu cầu phải sử dụng máy siêu ly tâm và quy trình tốn thời gian.

Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ ở người nhắm vào việc phân lập EV sử dụng phức hợp kháng thể tetrameric nhận biết CD9, CD63 và CD81 bằng các hạt từ tính. Các EV đã đánh dấu được phân tách bằng nam châm EasySep™ mà không cần sử dụng cột và vẫn ở trong ống sau khi các thành phần chất lỏng sinh học không mong muốn được đổ ra.

EV từ chất lỏng sinh học, bao gồm huyết thanh và huyết tương, và từ môi trường nuôi cấy, có thể được phân lập trong ít nhất 30 phút và sẵn sàng cho các ứng dụng tiếp theo, bao gồm tách chiết RNA, Western blot hoặc khối phổ. Số liệu dữ liệu trên trang sau chứng minh năng suất, chất lượng và khả năng tương thích xuôi dòng cao của EV được phân lập bằng Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ ở người.

Quy trình thực hiện

Hình 1. Quy trình phân lập EV khỏi chất lỏng sinh học với Bộ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ ở người

Hình 2. Hình ảnh của EV được phân lập từ huyết tương bằng Bộ chọn lọc dương tính túi ngoại bào của EasySep™

Phân tích kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) cho thấy các EV có nguồn gốc từ huyết tương còn nguyên vẹn và có dạng hình cầu (mũi tên). Các EV phân lập được gắn vào phức hợp kháng thể tetrameric và các hạt từ tính.

Biểu hiện và phục hồi protein Tetraspanin của EV bằng cách sử dụng Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ Human Pan/CD9/CD63/CD81.

Hình 3. Tỉ lệ thu hồi EV biểu hiện protein Tetraspanin bằng cách sử dụng Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ Human Pan/CD9/CD63/CD81.

(A) EV được phân lập từ huyết tương bằng Bộ dụng cụ chọn lọc dương tính túi ngoại EasySep™ ở người hoặc siêu ly tâm vi phân ngắn (2 x 70 phút, 100.000 x g), và các phần phân lập được phân tích biểu hiện protein tetraspanin bằng Western blot.

(B) Tỉ lệ thu hồi EV tương đương hoặc cao hơn thu được từ dịch nổi môi trường MesenCult™-ACF Plus đã nuôi cấy tế bào gốc trung mô (MSC) và huyết tương sử dụng bộ EasySep™ Human Pan Extracellular Vesicle Positive Selection Kit khi so sánh với EV được phân lập bằng cách sử dụng phương pháp phân lập EV dựa trên cơ chế miễn dịch có sẵn trên thị trường khác.

Hình 4. 10 thuật ngữ bản thể gen khoang tế bào hàng đầu dành cho EV được phân lập từ huyết tương hoặc dịch nổi môi trường nuôi cấy MSC bằng cách sử dụng Bộ chọn lọc dương tính túi ngoại bào EasySep™ ở người

Các protein có trong EV được phân lập từ (A) huyết tương và (B) dịch nổi môi trường nuôi cấy MSC sử dụng EasySep™ Human Pan-Extracellular Vesicle Positive Selection Kit đã được phát hiện bằng phân tích protein. Sau đó, chúng được nhóm theo thuật ngữ Gene Onology của EV, xác nhận chất lượng và khả năng tương thích của EV được phân lập với phân tích khối phổ.

Hình 5. Các microRNA thông thường (miRNA) trong EV có nguồn gốc từ huyết tương được phân lập bằng bộ EasySep™ Human Pan-Extracellular Vesicle Positive Selection Kit

Các microRNA (miRNA) tìm thấy trong EV có nguồn gốc từ huyết tương được phát hiện bằng RT-qPCR chứng minh khả năng tương thích của EasySep™ Human Pan-Extracellular Vesicle Positive Selection Kitvới quá trình chiết RNA và phân tích RNA ở hạ lưu. Sự gia tăng giá trị Ct sau khi ly giải EV bằng cách sử dụng quá trình phá hủy Triton™X-100 và RNase 0,1% chứng tỏ tính toàn vẹn của EV được phân lập.

Thông tin sản phẩm

Sản phẩm	Thể tích chất lỏng sinh học được xử lý	Catalog #
EasySep™ Human Pan-Extracellular Vesicle Positive Selection Kit	20 mL	17891
EasySep™ Human Extracellular Vesicle (CD81) Positive Selection Kit	20 mL	17892
EasySep™ Human Extracellular Vesicle (CD9) Positive Selection Kit	20 mL	17894
EasySep™ Human Extracellular Vesicle (CD63) Positive Selection Kit	20 mL	17895
EasySep™ Extracellular Vesicle PE Positive Selection Kit	20 mL	100-0812