Kiểm Tra Đơn Vị Tế Bào Gốc Vô Trùng Bằng Hệ Thống Phát Hiện Vi Sinh Tự Động

1. Mô tả:

Các sản phẩm liệu pháp tế bào (cell therapy) được cấp phép sử dụng đều được yêu cầu kiểm tra vô trùng như được mô tả trong bộ luật quy định liên bang của Mỹ (code of federal regulation – CFR), mục 21, phần 610.12. Quy định Liên bang cho phép sử dụng các phương pháp thay thế nếu được xác nhận với vật liệu thử nghiệm và cho thấy tương đương với phương pháp tiêu chuẩn (21 CFR 60,9). Hiện nay, có nhiều hệ thống phát hiện vi sinh tự động đang được sử dụng trên thị trường, nhưng trong bài này, chúng tôi chỉ mô tả phương pháp/ công nghệ phát hiện vi khuẩn, nấm mốc, và nấm men sử dụng hệ thống BacT/Alert 3D (hệ thống máy cấy máu hoàn toàn tự động) (bioMeriuex, Pháp) sử dụng cảm biến đo màu và ánh sáng phản xạ để theo dõi sự hiện diện và tạo ra carbon dioxide (CO2) trong chai môi trường nuôi cấy BACT/ ALERT®. Nếu có sự hiện diện của vi sinh vật, chúng sẽ tạo ra CO2, như khi chúng chuyển hóa các cơ chất trong môi trường nuôi cấy. Màu sắc của cảm biến dưới đáy chai chuyển sang màu vàng khi nó phản ứng với CO2. Khi tốc độ sản sinh CO2 đạt đến một ngưỡng, hệ thống sẽ gắn cờ cho chai là dương tính.

2. Thời gian thực hiện quy trình:

Ngày cấy: 15 phút.
Thời gian nuôi cấy: từ 7 đến 14 ngày.

3. Tóm tắt quy trình:

Cấy mẫu sản phẩm liệu pháp tế bào (mẫu máu cuống rốn, tủy xương, máu ngoại vi trước và sau khi xử lý, trong lưu trữ tế bào gốc và trước khi ghép tế bào gốc) vào môi trường nuôi cấy.
Tiến hành nuôi cấy trong hệ thống phát hiện vi sinh tự động BacT/Alert 3D và theo dõi liên tục sự phát triển của vi sinh vật, và nuôi cấy khi cần thiết.

4. Thiết bị và dụng cụ cần thiết:

Hệ thống phát hiện vi sinh tự động BacT/Alert 3D (thiết bị nuôi cấy máu).
Bơm kim tiêm vô trùng.
Găng tay dùng một lần.
Dụng cụ chứa chất thải nguy hại sinh học phù hợp.

5. Vật tư tiêu hao:

Chai cấy máu hiếu khí FA Plus (mã số 412990): môi trường nuôi cấy hiếu khí BacT/Alert
Chai cấy máu kỵ khí FN Plus (mã số 412991): môi trường nuôi cấy kỵ khí BacT/Alert.

6. Quy trình: liên hệ để được hỗ trợ.

7. Tiêu chí chấp nhận:

Không có vi sinh được tăng sinh trong chai cấy máu (ở cuối thời kỳ ủ).

8. Một số ghi chú quan trọng:

Bởi vì các mẫu sản phẩm trị liệu tế bào có thể chứa các chất gây nhiễu dẫn đến kết quả âm tính giả, mỗi loại mẫu được yêu cầu thẩm định sự phù hợp của phương pháp (thẩm định PQ, Performance Qualification) trên hệ thống phát hiện vi sinh tự động BacT/Alert (nhiễm bateriotasis và nhiễm nấm).
Nên tuân thủ theo hướng dẫn vận hành hệ thống BacT/Alert trong nạp và lấy mẫu từ hệ thống BacT/Alert.
Nhà sản xuất bioMerieux (Mỹ) cung cấp nhiều loại môi trường nuôi cấy (BacT/Alert media) để phát hiện nhiều loại vi sinh vật, bao gồm cả vi khuẩn hiếu khí, vi khuẩn kỵ khí, nấm men và nấm. Tuy nhiên, các phòng lab, ngân hàng tế bào gốc nên thẩm định loại môi trường nuôi cấy phù hợp.
Kiểm tra giới hạn kiểm tra và tính chuyên biệt của môi trường nuôi cấy (chai cấy máu hiếu khí FA Plus và chai cấy máu kỵ khí FN Plus) được cung cấp bởi nhà sản xuất bioMerieux.

Tài liệu tham khảo: