Câu Hỏi Thường Gặp Về Ống Ly Tâm SepMate™
Tìm câu trả lời cho các câu hỏi thường gặp (FAQ) về ống SepMate™, cho phép phân lập tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC) một cách dễ dàng chỉ trong 15 phút.
1. Tôi có thể sử dụng ống SepMate™ với các mẫu không phải máu toàn phần và tủy xương (ví dụ: LRSC, lớp buffy coat, bạch cầu, tế bào huyền phù từ mô) hoặc với các mẫu máu toàn phần không phải của người không?
Mục đích sử dụng của các ống SepMate™ không bao gồm bạch cầu, lớp buffy coat, buồng hệ thống giảm bạch cầu (LRSC), tế bào huyền phù từ các mô khác hoặc các mẫu không phải của người. Tuy nhiên, nếu bạn quan tâm đến việc xử lý các mẫu này bằng ống SepMate™, vui lòng liên hệ với Biogroup chúng tôi để biết thêm thông tin.
2. Môi trường gradient tỷ trọng nào có thể được sử dụng với ống SepMate™?
Nên sử dụng môi trường có tỷ trọng 1,077 g/mL được thiết kế để phân tách các tế bào đơn nhân, chẳng hạn như Lymphoprep (Danh mục số 07851), để sử dụng với các ống SepMate™. Nếu có câu hỏi liên quan đến khả năng tương thích của ống SepMate™ với các môi trường gradient tỷ trọng khác, vui lòng liên hệ với Biogroup chúng tôi.
Nguyên tắc sử dụng ly tâm gradient tỷ trọng để phân lập tế bào
Tìm hiểu thêm về ly tâm gradient tỷ trọng và một số loại môi trường gradient tỷ trọng.
3. Máy ly tâm có loại rotor nào có quan trọng không?
Nên sử dụng rotor văng với bucket khi sử dụng với các ống SepMate™ trong quá trình phân lập dựa trên ly tâm tỷ trọng vì chúng mang lại độ phân giải tách hạt (tế bào) cao nhất.
4. Tôi nên sử dụng cài đặt phanh như thế nào trên máy ly tâm?
Mặc dù tờ thông tin của ống SepMate™ chỉ định cách sử dụng phanh, lực giảm tốc mạnh có thể làm nhiễu loạn dải tế bào đơn nhân (MNC) tại huyết tương – bề mặt tiếp xúc Lymphoprep™, dẫn đến tình trạng tế bào bị “đục” hoặc khuếch tán. Các kiểu dáng và nhãn hiệu máy ly tâm khác nhau có thể cung cấp tốc độ giảm tốc khác nhau khi phanh. Nếu không nhìn thấy được lớp MNC sau quá trình ly tâm với phanh được cài đặt ở mức cao, hãy giảm tốc độ của giảm tốc (hãm) xuống mức trung bình hoặc thấp cho lần phân tách tiếp theo.
5. Có bình thường không khi không nhìn thấy dải MNC riêng biệt ở bề mặt huyết tương và gradient tỷ trọng, phía trên phần chèn? Thay vào đó, tôi thấy các tế bào bị “đục” hoặc phân tán trong toàn bộ thể tích phía trên phần chèn.
Một dải MNC riêng biệt sẽ được nhìn thấy ở bề mặt môi trường gradient tỷ trọng huyết tương sau quá trình ly tâm. Huyền phù tế bào “bị đục” hoặc khuếch tán thường cho thấy sự phân tách không đủ (tốc độ/thời gian ly tâm) hoặc mẫu bị trộn do lắc/rung (mất cân bằng máy ly tâm) trong quá trình phanh; Lực dừng đột ngột hoặc lực giảm tốc mạnh trong quá trình phanh cũng được cho là góp phần tạo ra dải MNC “đục” hoặc khuếch tán và việc cài đặt phanh ở mức trung bình hoặc thấp có thể giúp giảm thiểu tác động này. Tuy nhiên, dải MNC “đục” hoặc khuếch tán sẽ không ảnh hưởng tiêu cực đến hiệu suất phân lập vì toàn bộ phần nổi phía trên được thu hoạch thông qua quá trình đổ.
6. Tôi quan sát thấy một số tế bào nhiễm RBC sau khi phân lập MNC; điều này có bình thường không?
Việc nhiễm hồng cầu còn sót lại thường phụ thuộc vào mẫu và thường được quan sát nhất ở các mẫu máu cũ (>24 giờ); nếu có lượng hồng cầu đáng kể phía trên phần chèn, thì ống SepMate™ có thể quay ở tốc độ 1200 x g trong thêm 10 phút khi bật phanh. Ngoài ra, nếu lo ngại sự hiện diện của hồng cầu còn sót lại, chúng có thể được ly giải bằng cách thực hiện một trong các bước rửa bằng Dung dịch Amoni Clorua (Danh mục #07800).
7. Tôi có thể tách bạch cầu trung tính khỏi máu toàn phần bằng SepMate™ không?
SepMate™ không được khuyến nghị để phân lập bạch cầu trung tính từ máu toàn phần. Khi được sử dụng kết hợp với Lymphoprep™ hoặc Ficoll, tỷ trọng của bạch cầu trung tính sẽ lắng đọng qua dung dịch môi trường gradient tỷ trọng trong quá trình ly tâm. Điều này có nghĩa là bạch cầu trung tính sẽ bị mắc kẹt bên dưới phần chèn.
Nếu bạn muốn tách bạch cầu trung tính ở người khỏi máu toàn phần của con người, hãy tìm hiểu thêm về cách phân lập từ tính miễn dịch bằng cách sử dụng Bộ kit phân lập bạch cầu trung tính ở người (Danh mục số 19666).
Phân lập bạch cầu trung tính trực tiếp từ máu toàn phần bằng EasySep™ Direct
EasySep™ Direct miễn dịch từ tính làm cạn kiệt các tế bào hồng cầu và tế bào không mong muốn chỉ trong một bước mà không cần ly tâm gradient tỷ trọng, ly giải hồng cầu hoặc các bước tiền xử lý khác có thể làm thay đổi chức năng tế bào hoặc tăng thời gian phân lập tế bào.
8. Tôi có thể sử dụng 1X PBS thay vì 1X PBS + 2% FBS không?
Có thể sử dụng 1X PBS thay cho 1X PBS + 2% FBS khi sử dụng với ống SepMate™. Tuy nhiên, 2% FBS thường được đưa vào để duy trì khả năng tồn tại của tế bào bên cạnh việc giảm thiểu sự kết dính không đặc hiệu của kháng thể trong các xét nghiệm tiếp theo.
9. Nên sử dụng thuốc chống đông máu nào và tại sao?
SepMate™ tương thích để sử dụng với máu được thu thập bằng cách sử dụng tất cả các loại thuốc chống đông máu, bao gồm nhưng không giới hạn ở heparin, Thuốc chống đông máu Citrate Dextrose Solution A (ACDA) và axit ethylenediamine tetraacetic (EDTA).
10. Tôi có thể tự động hóa quá trình phân lập PBMC bằng SepMate™ không?
SepMate™ là một công cụ tuyệt vời để phân lập tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC) một cách nhất quán và dễ dàng. Nó làm giảm quy trình xuống chỉ còn 15 phút nhưng không thể sử dụng nó để tự động hóa quy trình. Nếu bạn quan tâm đến việc tự động hóa quá trình phân lập PBMC, chúng tôi khuyên bạn nên tìm hiểu cách sử dụng Bộ kit phân lập PBMC EasySep™ Direct Human cùng với các thiết bị RoboSep™. Với những công cụ này, bạn có thể tự động hóa việc phân lập PBMC để tiết kiệm thời gian thực hiện, giảm thiểu việc xử lý mẫu và tăng công suất xử lý mẫu.
Tìm hiểu thêm về tự động hóa phân lập PBMC >
PBMC: Mọi điều bạn cần biết
Tìm các giao thức và công cụ giúp bạn cô lập, tìm nguồn, đông lạnh và rã đông PBMC của con người trong nghiên cứu của mình.
Nguồn | STEMCELL Technologies
