Lựa Chọn Máy Đếm Tế Bào Phù Hợp Với Loại Tế Bào

Blog

Lựa Chọn Máy Đếm Tế Bào Phù Hợp Với Loại Tế Bào

11/07/2023 0 Bình luận

Các loại tế bào có thể được đếm với các máy đếm tế bào khác nhau

Máy đếm tế bào dựa trên trường sáng (Brightfield-Based Cell Counter)

Dựa trên trường sáng, máy đếm tế bào định lượng bằng cách nhuộm các tế bào chết bằng thuốc nhuộm trypan blue, do các tế bào này đã bị vỡ màng tế bào (lớp ngoài cùng của tế bào), trypan blue sẽ thấm qua và làm các tế bào này có màu xanh đậm, tế bào sống không bắt màu nhuộm.

Một nhược điểm của sự lựa chọn này là không thể dùng với các mẫu tế bào chứa mảnh vụn và các thành phần tạp khác. Khi dùng trypan blue, thuốc nhuộm không chỉ nhuộm tế bào mà còn nhuộm luôn các chất khác và coi chúng là tế bào chết, dẫn đến kết quả không chính xác. Vì vậy, điều quan trọng là sử dụng các mẫu tế bào không có mảnh vụn. Với giới hạn này, các mẫu được sử dụng phổ biến nhất cho trường sáng là các dòng tế bào thuần (cell line).

Dòng tế bào (cell lines) là gì? - Nói một cách đơn giản, các dòng tế bào là quần thể các tế bào đã được cấy chuyền từ các tế bào sơ cấp và được giữ để duy trì trong cùng một điều kiện trong quá trình cấy chuyền liên tục. Do đó, không có mảnh vụn hoặc các thành phần tạp khác, giúp cho việc đếm tế bào bằng máy đếm tế bào dựa trên trường sáng dễ dàng và chính xác hơn nhiều.

cell lines

Một số ưu điểm và nhược điểm của dòng tế bào thuần:

Ưu điểm	Nhược điểm
Dễ sử dụng Chi phí hiệu quả Cung cấp nguyên liệu không giới hạn với cùng điều kiện Mẫu tế bào không có mảnh vụn Hữu ích cho các thí nghiệm cần số lượng mẫu lớn như sản xuất vaccine	Có khả năng gây ra biến đổi kiểu gen và kiểu hình.

Các dòng tế bào (cell lines) hay được sử dụng như:

HeLa cells: tế bào bất tử đầu tiên của con người
HEK 293 (human embryonic kidney-derived epithelial cells): tế bào biểu mô có nguồn gốc từ phôi thai người
CHO (Chinese hamster ovary): tế bào buồng trứng của chuột hamster Trung Quốc
Jurkat (human lymphoblast cells): tế bào lympho T người
SF9: (pupal ovarian tissue cells from fall armyworm): tế bào mô buồng trứng sâu

Một số dòng máy đếm tế bào tự động bằng phương pháp trypan blue:

	EVE PLUS – máy đếm tế bào tự động nhanh nhất thế giới	EVE HT – máy đếm tế bào tự động thông lượng cao

Thời gian phân tích	< 1 giây (chế độ lấy nét thủ công) < 10 giây (chế độ lấy nét tự động)	3 phút cho 48 test
Phạm vi đo	1x10⁴ – 2x10⁷tế bào/mL	1x10⁴ – 2x10⁷tế bào/mL
Kích thước tế bào	5 – 60 mm	5 – 80 mm

Máy đếm tế bào dựa trên thuốc nhuộm huỳnh quang (Fluorescence Cell Counter)

Đối với thuốc nhuộm huỳnh quang, hầu hết các tế bào có nhân đều có thể được sử dụng để định lượng số lượng tế bào. Không chỉ các dòng tế bào (cell lines) mà cả các tế bào sơ cấp (primary cells) cũng có thể được sử dụng bất kể sự tồn tại của các mảnh vụn hoặc thành phần tạp khác.

Tế bào sơ cấp là gì? – Các tế bào sơ cấp là các tế bào được lấy trực tiếp từ mô sinh vật sống. Có hai loại tế bào sơ cấp khác nhau là tế bào bám dính và tế bào huyền phù. Cả hai loại này đều được sử dụng nhiều cho nghiên cứu, trong đó tế bào bám dính được dùng nhiều trong xét nghiệm tế bào học (cytology), tế bào huyền phù được dùng nhiều trong sản xuất protein quy mô lớn.

Một số tế bào sơ cấp thường được sử dụng:

Các tế bào biểu mô (Epithelial cells)
Nguyên bào sợi (Fibroblasts)
Tế bào sừng (Keratinocytes)
Tế bào hắc tố (Melanocytes)
Tế bào nội mô (Endothelial cells)
Tế bào cơ (Muscle cells)
Tế bào tạo máu (Hematopoietic cells)
Tế bào gốc trung mô (Mesenchymal stem cells)

Tế bào bám dính

Các tế bào phát triển gắn liền với bề mặt nuôi cấy

Tế bào huyền phù

Các tế bào trôi nổi trong môi trường

Một số ưu và nhược điểm khi dùng tế bào sơ cấp:

Ưu điểm	Nhược điểm
Tương tự môi trường in vivo nên có tính tương đồng cao Cho phép thực hiện ít thử nghiệm trên động vật hơn	Chi phí cao Giới hạn số lần tăng sinh Mất nhiều thời gian để phát triển so với dòng tế bào thuần

Thiết bị đếm tế bào tự động dựa trên huỳnh quang:

ADAM MC2 và ADAM CellT
Thời gian phân tích	< 25 giây
Thuốc nhuộm	Acridine Orange (AO)/ Propidium Iodide (PI)
Loại tế bào	Dòng tế bào (cell lines), PBMCs, tế bào gốc mô mỡ, tế bào sơ cấp, ….
Phạm vi đo	5x10⁴ – 2x10⁷tế bào/mL