Hướng Dẫn Sử Dụng Cột Sắc Ký Loại Trừ Kích Thước (SEC)
Quy trình phân lập túi ngoại bào với cột sắc ký SEC
Hướng dẫn sử dụng cột sắc ký loại trừ kích thước (SEC)
- Ổn định cột SEC ở vị trí thẳng đứng.
- Tháo nắp cột (nắp trên và dưới) và để dung dịch đệm rã đông chảy qua cột. Loại bỏ phần dung dịch chảy ra. Không để cột bị khô.
- Cho tổng cộng 150mL D-PBS (Không có Ca++ và Mg++) vào cột. Loại bỏ phần dung dịch chảy ra. Ngay lập tức tiến hành bước 4.
LƯU Ý: Giữ cho nền gel cột luôn ẩm.
- Nạp 5 – 20mL mẫu vào cột và bắt đầu thu các giọt dung dịch chảy ra, mỗi giọt 1mL.
- Khi tất cả mẫu đã được nạp vào nền gel, tiếp tục thêm D-PBS vào cột.
- Tiếp tục thu thập các giọt 1 mL cho đến khi thu được các phần mong muốn.
LƯU Ý: EV thường thu được từ giọt 15 – 35. Protein thu được từ giọt 36 trở đi. Kết quả có thể khác nhau tùy theo loại mẫu. Giữ lại tất cả các thành phần để phân tích.
- Để rửa cột, đổ D-PBS lên trên cột và cho 150 mL D-PBS chảy qua Loại bỏ phần dung dịch chảy ra.
- Thêm 1 mL D-PBS vào cột và đóng nắp trên và dưới cột. Điều này sẽ đảm bảo rằng nền gel vẫn ướt.
LƯU Ý: Bảo quản cột ở nhiệt độ 2 – 8°C; mỗi cột có thể được sử dụng tối đa 5 lần. Cột SEC không được coi là vô trùng.
